液相色谱中“保留时间不稳定，定性重复性差”之全流程诊断和解决方案

题记：

当我们做色谱分析时，最常碰到的一个比较麻烦的问题是色谱图的定性重复性有点差，大于0.5%，也就是保留时间不好。那么碰到这个问题应该怎么处理呢？

科诺美资深攻城狮王老师给同学们梳理了大部分可能因素，相信只要按照顺序一一排查就能解决。

泵或者管路中有气泡，前后漂移，可通过排气等将气泡赶出。

泵单向阀中的宝石球污染或磨损，造成流动相倒流，压力不稳定，保留时间前后漂移。解决办法是超声单向阀，如不能解决则更换新单向阀。

泵比例阀控制失灵，不同流路流动相比例不断变化，保留时间前后漂移。解决方法是更换清洗比例阀或更换部件。

泵柱塞杆和密封圈磨损污染，导致泵漏液。解决办法是更换柱塞杆和密封圈。

在线混合器混合能力变差，不接梯度测试混合能力，并同手工配置流动相比较。解决办法是清洗或更换混合器。

系统管路有堵塞，引起压力高或不稳定，导致保留时间漂移。解决办法是超声清洗不锈钢管路或更换管路，PEEK管路可以两头剪短或更换。

沉子滤头污染或堵塞，流动相抽取受阻，导致流速不稳或降低。解决办法是超声清洗或更换沉子滤头。

色谱柱样品超载，解决办法是减少进样量。

色谱柱键合的固定相流失，注意流动相pH值在容许范围。

硅胶填料的位点被活化，使用可修饰流动相，加三乙胺或使用碱灭活柱等。