TDM实战 | HPLC法测定血清中阿米卡星的含量

引言

阿米卡星（Amikacin，Amk）是一种半合成的氨基糖苷类抗生素（Aminoglycosides，AGs），具有广谱抗菌活性。近年来，由于头孢菌素类和喹诺酮类抗菌药物的广泛应用，加上存在确切的耳毒性、肾毒性和神经肌肉毒性，AGs类药物的临床应用受到了一定限制，但是因为AGs属静止期杀菌剂，对铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌等常见革兰阴性杆菌的抗生素后效应（PAE）较长，杀菌作用完全，故仍是与β-内酰胺类抗菌药物或万古霉素等糖肽类抗菌药物联合用药的重要品种，用于治疗需氧革兰阴性杆菌和阳性菌所致的严重感染，在临床感染的控制上享有独特的地位。

Amk的TDM具有重要的临床意义

AGs为浓度依赖型抗生素，常要求较高的峰浓度以提高抗菌活性，较低的谷浓度以减少毒性。Amk的抗感染效果与血药峰浓度（Cmax）和 MIC 比值（Cmax/MIC）及药时曲线下面积（AUC0-24）与 MIC 比值（AUC0-24/MIC）呈现明显的相关性，其中Cmax/MIC被认为是杀菌疗效的最佳指针，应超过12。

因此，建立快速、灵敏、准确、经济的治疗药物监测（Therapeutic drug monitoring，TDM）方法，实行Amk的给药方案个体化具有非常重要的临床意义，尤其新生儿、老年和肾功能减退患者应进行TDM。

Amk的血药峰浓度（Cmax）（5-10mg/kg，一日多次）应保持在30-35μg/mL（肺炎，假单胞菌感染）和20-30μg/mL（非假单胞菌革兰氏阴性感染），谷浓度（C0）< 5μg/mL；Amk的Cmax（15mg/kg，一日一次）应维持在56～64μg/mL，C0< 5μg/mL。

适合临床应用和广泛推广的最佳TDM方法

已报道的体内Amk的浓度测定方法主要有微生物法、免疫分析法、气相色谱-质谱法以及高效液相色谱法（ HPLC），其中 HPLC 法以期优异的专属性和灵敏度被认为是TDM的最佳方法。

Amk分子结构中含有多个羟基和氨基，具有很强的极性，且没有典型的紫外（UV）吸收，只有末端吸收，因此传统的HPLC-UV法常采用柱前/柱后衍生化来提高Amk在反相色谱（RP-HPLC）上的保留和UV吸收，因此样本前处理复杂耗时，检测通量低，且在衍生化过程中有存在多种影响衍生化产物的因素，会对定量造成影响，所以此方法并不适合Amk的TDM；而HPLC-MS因其优异的灵敏度也被用于体内Amk的浓度测定中，但HPLC-MS的仪器购置和维护成本非常高，且对操作人员技术要求高，尚未在医院得到普及，该方法也不利于Amk的TDM项目的广泛推广。

本文基于Chromai的二维超高效液相色谱（2D-UHPLC）系统建立了一种简单快捷、专属性好、灵敏度高的血清中Amk的定量方法，有效解决了上述问题，通过一维富集净化、二维分离分析的方式，不仅实现了简单快捷的样本前处理操作，而且还可达到媲美HPLC-MS技术的灵敏度和分辨率，非常适合Amk的TDM项目的应用和广泛推广。