直面食品安全新标准—食品中维生素的含量测定（II）
前 言
维生素是机体维持正常代谢和功能所必须的一类化合物，一般无法由生物体自身合成，需要通过饮食等手段获得。
B族维生素作为辅酶，对人体内糖、脂肪和蛋白质的代谢起着至关重要的作用。其中维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、维生素B9、维生素B12等为人体常用。维生素C（又名抗坏血酸）具有一系列的生理功能，如增强人体免疫功能、预防和治疗缺铁性贫血、预防和治疗坏血病、促进胶原的形成和类固醇的代谢、抗衰老、防癌抗癌等作用。维生素K具有防止新生婴儿出血疾病、预防内出血及痔疮、促进血液正常凝固等生理作用。
因此，维生素作为营养强化剂已经在食品工业的部分产品中开始使用，测定食品中维生素的含量，不仅可以评价食品的营养价值，而且还可以监督维生素作为营养强化剂的剂量，以防止摄入量过多引起中毒反应。
近两年，食品安全国家标准相继更新了食品中维生素B12、B6、K2和维生素D的测定方法，上期已对维生素D在线柱切换反相液相色谱法进行了介绍，本期将重点介绍维生素B1、B2、B6、B12、C、K1、K2的解决方案。
仪器配置
01
仪器
Chromai Leaps高效液相色谱系统
Leaps四元泵（P40）
Leaps标准型自动进样器（带制冷）（A10C）
Leaps 标准加热型柱温箱（C10）
Leaps紫外-可见检测器（D10）或Leaps荧光检测器（FL）
02
色谱柱
维生素B1/K1：Chromai Lotus C18（4.6*250 mm, 5 μm）(货号：3.1.04.0009)
维生素B2/B6/K2：Chromai Lotus C18（4.6*150 mm, 5 μm）（货号：3.1.04.0008）
维生素B12：Chromai Lotus C18（4.6*150 mm, 3 μm）（货号：Y.1.01732）
维生素C：Chromai Lotus Polar C18（4.6*250 mm, 5 μm）（货号：Y.1.01684）
实验结果和讨论
01
标准溶液色谱图
参考标准方法中所列色谱条件，得到各种维生素标准溶液谱图，如图1所示。
维生素B1
维生素B2
维生素B6
维生素B12
维生素C
维生素K1
维生素K2
图1 维生素标准溶液色谱图
02
线性范围及检出限
将不同浓度的系列标准工作溶液分别进样，得到并绘制标准曲线，在线性范围内，线性相关系数均大于0.999。
根据信噪比数据得到各化合物的检出限，符合相应标准要求。
表1 线性范围及检出限
|
化合物名称 |
线性范围 |
标准曲线方程 |
R2 |
检出限 |
|
|
维生素B1 |
0.05~1.0 μg/mL |
y=2.705x+0.0021 |
0.9999 |
0.8 μg/100g |
|
|
维生素B2 |
0.02~1.0 μg/mL |
y=17,571,699.20x- 27,372.52 |
0.9999 |
0.1 μg/100g |
|
|
维生素B6 |
吡哆醛 |
0.015~1.0 μg/mL |
y=17,226,383.79x- 66,845.44 |
0.9999 |
0.005 mg/kg |
|
吡哆醇 |
0.015~1.0 μg/mL |
y=24,064,833.66x- 253,157.10 |
0.9996 |
0.005 mg/kg |
|
|
吡哆胺 |
0.015~1.0 μg/mL |
y=16,244,871.61x- 117,154.16 |
0.9999 |
0.02 mg/kg |
|
|
维生素B12 |
30~200 ng/mL |
y=0.0866x-0.0816 |
0.9999 |
0.2 μg/100g |
|
|
维生素 C |
L(+)-抗坏血酸 |
0.5~50.0 μg/mL |
y=56.67047x+0.34317 |
0.9998 |
固体 0.016 mg/100g 液体 0.003 mg/100g |
|
D(-)-抗坏血酸 |
0.5~50.0 μg/mL |
y=54.99530x-6.29638 |
0.9999 |
固体 0.067 mg/100g 液体 0.013 mg/100g |
|
|
维生素 K1 |
10~400 ng/mL |
y=0.02110x+0.00348 |
0.9999 |
1.5 μg/100g |
|
|
维生素 K2 |
四烯甲萘醌（MK-4) |
0.025~1.0 μg/mL |
y=5.19057x-0.01373 |
0.9999 |
5.6 μg/kg |
|
七烯甲萘醌 （MK-7) |
0.025~1.0 μg/mL |
y=3.48727x-0.01573 |
0.9998 |
14 μg/kg |
|
|
九烯甲萘醌 （MK-9) |
0.05~1.0 μg/mL |
y=2.69603x-0.01425 |
0.9995 |
40 μg/kg |
|
03
系统精密度
对一定浓度的样品溶液，连续进样六针考察仪器系统的精密度，结果见表2。
在Chromai Leaps高效液相色谱系统中，除维生素C外，保留时间RSD均小于0.1%，峰面积RSD均小于0.4%，系统精密度结果优异，满足食品中维生素含量测定的定量要求。
表2 连续六针进样精密度结果
|
化合物名称 |
保留时间 RSD% |
峰面积 RSD% |
|
|
维生素B1 |
0.06% |
0.15% |
|
|
维生素B2 |
0.10% |
0.28% |
|
|
维生素B6 |
吡哆醛 |
0.01% |
0.11% |
|
吡哆醇 |
0.01% |
0.11% |
|
|
吡哆胺 |
0.02% |
0.13% |
|
|
维生素B12 |
0.10% |
0.13% |
|
|
维生素C |
L(+)-抗坏血酸 |
0.12% |
0.48% |
|
|
D(-)-抗坏血酸 |
0.15% |
0.54% |
|
维生素K1 |
0.03% |
0.14% |
|
|
维生素K2 |
四烯甲萘醌（MK-4) |
0.02% |
0.04% |
|
七烯甲萘醌（MK-7) |
0.01% |
0.32% |
|
|
九烯甲萘醌（MK-9) |
0.01% |
0.32% |
|
结论
采用Chromai Leaps高效液相色谱系统，搭配紫外检测器或荧光检测器，进行食品中各种维生素含量的测定，在对应的食品安全国家标准规定的线性范围内，线性相关系数均大于0.999，检出限结果优于标准中规定的要求，并且连续六针进样的系统精密度结果优异，符合维生素含量测定的定量要求。
参考文献
[1] GB 5009.84-2016《食品安全国家标准 食品中维生素B1的测定》第一法 高效液相色谱法
[2] GB 5009.85-2016《食品安全国家标准 食品中维生素B2的测定》第一法 高效液相色谱法
[3] GB 5009.154-2023《食品安全国家标准 食品中维生素B6的测定》第三法 高效液相色谱-荧光检测法
[4] GB 5009.285-2022《食品安全国家标准 食品中维生素B12的测定》第一法 液相色谱法
[5] GB 5009.86-2016《食品安全国家标准 食品中抗坏血酸的测定》第一法 高效液相色谱法
[6] GB 5009.158-2016《食品安全国家标准 食品中维生素K1的测定》第一法 高效液相色谱-荧光检测法
[7] GB 5009.290-2023《食品安全国家标准 食品中维生素K2的测定》
更多详情、欢迎来电垂询
（86）010-8042 9960
销售热线 分机168
服务热线 分机999
科诺美小助手·小美
ABOUT
科诺美（英文：Chromai），是中国领先的从事分析检测仪器与医疗诊断研发、生产、销售和服务的高科技技术企业。是中国仪器仪表学会、中国分析测试协会、中国医疗器械行业协会会员。公司专注于智能化科学仪器、分析检测与精准医疗。拥有国际水准的先进技术，拥有众多核心的专利技术，自主知识产权填补了国家空白。公司坚持自主创新，以振兴民族产业为己任，愿景是从根本上改变全球行业市场格局，让中国创造享誉全球，将科诺美打造成为卓越的国际品牌。科诺美致力于不断提升效率、降低分析成本，为客户创造价值。
