液相色谱仪六大核心部件的细致养护秘诀
楔子：近期王老师一直奔波于祖国的大江南北，一路追逐雷电的踪迹之余，也同时和广大小伙伴们沟通交流液相色谱的使用的心得体会，望着窗外的大雨磅礴，写下如下对于液相色谱的养护秘诀，希望能给所有实验室的小伙伴们带来收获和启发！
在液相色谱仪的精密世界中，每一个部件都扮演着不可或缺的角色。它们协同工作，将复杂的混合物分离成单一的纯净组分，为我们揭示样品的秘密。然而，就像任何高精度的仪器一样，液相色谱仪也需要定期的维护与保养，以确保其长期稳定运行和准确的分析结果。接下来，就让我们一起探索液相色谱仪六大核心部件的细致养护秘诀，让这台“化学侦探”始终保持最佳状态！
流动相溶剂瓶：清澈的起点
流动相溶剂瓶，如同液相色谱仪的“水源地”，其清澈与纯净直接关系到整个分析过程的准确性。为了确保溶剂的纯净，我们需要定期更换溶剂，并检查溶剂瓶的密封性，避免外界污染物的侵入。同时，对于易挥发的有机溶剂，如乙腈，我们应使用棕色溶剂瓶存储，减少光照引起的聚合反应，最好是能做到每天进行超声和过滤。这一过程就像是为“水源地”定期换水和滤水，确保水质清澈，为整个分析流程提供坚实的保障。
高压泵：心脏的稳定律动
高压泵，作为液相色谱仪的“心脏”，其稳定的工作状态对于整个系统的运行至关重要。为了保持高压泵的稳定输出，我们需要定期检查并清洗流路系统，确保流动相中无气泡、无杂质。同时，注意检查过滤头和单向阀是否堵塞，及时超声清洗或更换，避免堵塞导致的压力波动。这一过程就像是给“心脏”做定期体检，确保它始终保持稳定的律动。当然，想要一个稳压的高压泵，泵本身的设计也非常重要的，能主动压力脉动抑制的高压泵，才是智能的好的输液泵。科诺美凭着强大的研发实力，逐代迭代，开发出能主动进行压力脉动的超高压输液泵，双重保证了流速的稳定和压力的平稳。
自动和手动进样器：样品的精准传递
进样器，作为样品的“守门员”，其精准传递样品的能力直接影响到分析结果的准确性。为了确保进样器的正常工作，我们需要定期清洗进样针和进样器，避免样品残留导致的交叉污染。同时，对于手动进样器，我们还需注意操作技巧，如使用专用进样针、插针到底、及时清洗等，确保样品的精准传递。这一过程就像是训练一位精准的“守门员”，确保每一次传递都准确无误。
色谱柱：分离的艺术殿堂
色谱柱，作为液相色谱仪的“灵魂”，其高效的分离能力是整个分析过程的核心。为了保护色谱柱，我们需要避免压力和温度的急剧变化，选择合适的流动相，避免将复杂样品直接注入柱内等。同时，定期用强溶剂冲洗色谱柱，清除残留杂质，保持其高效分离能力。这一过程就像是维护一座“艺术殿堂”，确保它始终保持着最佳的分离效果。
01
避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓（如前所述）。
02
应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。
03
色谱柱反冲，反冲能快速冲出杂质和降低本身压力，但是一定根据具体情况确认是否反冲， 不是所有色谱柱都能反冲的。
04
选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
05
避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。
06
经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50~75ml。
下面列举一些色谱柱的清洗溶剂及顺序，作为参考：
硅胶柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇依次冲洗，然后再以相反顺序依次冲洗，所有溶剂都必须严格脱水。甲醇能洗去残留的强极性杂质，已烷使硅胶表面重新活化。
反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次冲洗，再以相反顺序依次冲洗。
如果下一步分析用的流动相不含缓冲液，那么可以省略最后用水冲洗这一步。一氯甲烷能洗去残留的非极性杂质，在甲醇（乙腈）冲洗时重复注射100~200µl四氢呋喃数次有助于除去强疏水性杂质。四氢呋喃与乙腈或甲醇的混合溶液能除去类脂。有时也注射二甲亚砜数次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脱能除去蛋白质污染。
阳离子交换柱可用稀酸缓冲液冲洗，阴离子交换柱可用稀碱缓冲液冲洗，除去交换性能强的盐，然后用水、甲醇、二氯甲烷（除去吸附在固定相表面的有机物）、甲醇、水依次冲洗。
07
保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。禁止将缓冲溶液留在柱内静置过晚上或更长时间。
08
色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗；另一种可能是大分子进入柱内，使柱头被污染；如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。
09
通常以硅胶为基质的色谱柱，只能在pH2~9范围内使用。柱子使用一段时间后，可能有一些吸附作用强的物质保留于柱顶，特别是一些有色物质更易看清被吸着在柱顶的填料上。新的色谱柱在使用一段时间后柱顶填料可能塌陷，使柱效下降，这时也可补加填料使柱效恢复。
每次工作完后，要用洗脱能力强的洗脱液梯度冲洗，例如ODS柱宜用甲醇水冲洗至基线平衡。当采用盐缓冲溶液作流动相时，使用完后应用无盐对应流动相冲洗。含卤族元素（氟、氯、溴）的化合物可能会腐蚀质不锈钢管道，不宜长期与之接触。
检测器：敏锐的“眼睛”
检测器，作为液相色谱仪的“眼睛”，其敏锐的捕捉能力对于分析结果的准确性至关重要。为了保持检测器的敏锐度，我们需要定期清洗和检查检测器的外壳和内部光路系统，确保无灰尘、无污染物。同时，注意避免强光和强电磁场的干扰，确保检测器能够准确捕捉样品信号。这一过程就像是给“眼睛”做定期保养，确保它始终保持着敏锐的捕捉能力。
系统整体：和谐的交响乐
除了以上五大核心部件的保养外，我们还需要注意系统整体的养护。这包括定期更换系统内的过滤器、检查管路连接是否紧固、避免长时间停机导致系统内部干燥等。同时，保持实验室的清洁和整洁也是非常重要的，避免灰尘和污染物对仪器造成损害。这一过程就像是维护一支和谐的交响乐团队，确保每个部件都能够在最佳状态下协同工作，共同演奏出美妙的科学乐章。
在养护液相色谱仪的过程中，我们不仅要注意技术细节，更要培养一种对科学的敬畏之心和对仪器的爱护之情。通过细心呵护这些精密的仪器，我们能够更好地探索科学的奥秘，为人类的进步和发展贡献自己的力量。
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